为获得单一的、纯度高的灵芝菌种，就需要通过生物学手段，将灵芝从混杂的微生物群中分离出来。

灵芝菌种分离物的提纯方法

分离、培养过程中难免带入杂菌，因此必须对分离物进行提纯。通常采用药物或生物技术将污染物排除。

灵芝菌种菌丝的提纯方法

分离获得菌丝，与转接到斜面或平板上后，有时会出现菌落边缘不整齐，色泽不一致或基质内分泌的色素不均一等，这是菌种不纯的表现，务必进行提纯。方法是，将斜面或平板上具有灵芝特征和生长速度较一致的菌落，用锋利的接种刀取先端菌丝移接至新的斜面或平板上，如此反复多次，获得纯菌丝。

灵芝菌种细菌污染的排除

锥形瓶内配制入PDA培养基加棉塞，0.103兆帕灭菌30分钟，在无菌条件下冷却近50℃，每升培养基内加入40毫克链霉素或金霉素，迅速分装入无菌试管或培养皿内制成斜面或平板备用。

1、覆盖除菌法：从污染的灵芝菌种内挑取少许菌丝体移接入上述具抑菌剂的PDA斜面或平梅培养基上，23~25℃下遮光培养，此温度下灵芝菌丝能正常生长，而细菌生长极慢。见菌丝生长蔓延后，再取1支具抑菌剂的斜面，加热溶化，并冷却至50℃左右，倒入上面已长灵芝菌丝的斜面或平板上，厚约2毫米，凝固后再放在上述温度下培养。这样，灵芝菌丝可穿过覆盖的培养基生长，而细菌被阻隔在新加培养基的下面，然后挑取先端菌丝转管培养即能提纯。

2、木屑滤菌法：将试管截去底，管内装少量木屑培养基两端加棉塞。灭菌、冷却，从一端接入被细菌污染的菌种1小块，23~25℃下遮光培养。灵芝菌丝能向木屑深处延伸，直至另一端。而细菌生长很慢，同时不能分解木屑而被阻留，可从另一端挑取灵芝菌丝进行转管。

灵芝菌种霉菌污染的排除方法

这里主要指操作不当带入霉菌，引起污染的排除方法。

1、覆盖抑菌法：斜面或平板上发现霉菌菌落时，用1块比菌落稍大的滤纸，蘸取0.5%多菌灵溶液覆盖在霉菌菌落上，抑制霉菌生长，而灵芝菌丝继续生长。然后，挑取先端菌丝转管纯化。

2、药物滤菌法：跟上述细菌木屑滤菌法操作相似，在木屑麸糠培养基内添加0.5%多菌灵，分装入无底试管内，两端加棉塞，灭菌后于一端接人带霉菌的分离物，28℃下遮光培养。因多菌灵对霉菌有较强的抑制作用，而对灵芝菌丝生长影响不大，当灵芝菌丝生长至另一端时即可转管纯化。

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