母种培养是菌种培养重要的第一步,其对原种栽培种以及栽培生产影响重大。因此有种植灵芝的网友咨询想种菜:怎样配制灵芝母种培养基?配制灵芝母种培养基需要注意什么?以下想种菜网就做简单介绍,供网友们参考。
配制灵芝母种培养基方法
1、准备好所需用品、试剂。主要包括各种营养物质、高压灭菌锅、天平、棉塞、试管(20毫米×200毫米)、稀碱液(1摩尔/升NaOH溶液,即4克氢氧化钠溶于100毫升水)、稀酸液(1摩尔/升盐酸溶液,即84毫升浓盐酸加水916毫升)等。
2、组分称量。按配方要求正确称取各种营养物质。
3、汁液配制。马铃薯或胡萝卜切成丝,加水1000毫升,文火煮沸15~20分钟,4层纱布过滤取汁。糯米粉加水调成糊状,然后稀释成1000毫升悬液。
4、培养液配制。以上制成的煮汁或悬液,按配方加入其他营养成分,并补足水至1000毫升。
5、调整pH值。用广泛pH试纸测定培养液的酸碱度,以pH值5.5~6.5为宜。若过酸,滴注稀碱液调整;若过碱,则用稀酸液调整。
6、加凝固剂。将琼脂(若为条形需剪短)放入所配液体内,文火煮沸,煮时不断搅拌至溶解。
7、分装。培养基煮好后趁热分装试管,装量为试管长度的1/5~1/4,然后塞上棉塞。倾倒时要防止培养基沾污管口,一旦沾上应用纱布擦净。试管要事先洗净,严防油污。新购试管因含游离碱,需用稀盐酸浸泡并清水冲洗,晒干或烘箱烘干备用。棉塞用未脱脂普通棉花,大小、松紧适中,要求与管壁紧贴。
8、灭菌。将分装好的试管,每11或13支(成单数)捆扎一起,棉塞端包扎塑料薄膜(防止灭菌时棉塞被冷凝水淋湿而报废),放入灭菌锅。
9、制斜面。经高压灭菌后,除去包扎的薄膜,直立于容器或框架内,使管内水蒸气向外界散发,当温度下降至50℃左右时(取试管1支贴放脸上,很烫但能放得住,约为50℃左右),即可整捆斜放在斜面板上,斜面长度不超过管长的1/2,冷却后即凝固成斜面培养基。若试管内培养基分装量不均匀,或试管数量不多,则可单支排放制成斜面。
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